继镁孚泰高特异性MMLV反转录酶(Cat.No.LT001-01)以“高RNA依赖活性+低DNA依赖活性”解决非特异性扩增难题后(点击了解),镁孚泰MMLV反转录酶筛选试剂盒再添创新力作——Longscript MMLV RTase Screening Kit(Cat.No.LT002-01)!这款专为长片段cDNA合成设计的产品,通过极致降低RNase H活性,显著提升模板利用率,攻克长链RNA反转录过程中的模板降解难题,助力基因表达分析、cDNA文库构建、RNA测序等前沿研究迈向更高精度!
反转录酶的RNase H活性
RNase H活性是反转录酶的一个固有特性,指其特异性水解 DNA-RNA 杂合链中 RNA 链的能力。在反转录过程中,以RNA为模板合成的互补DNA(cDNA)会与模板RNA形成DNA-RNA杂合链。RNase H活性可识别并切割杂合链中的RNA链,使cDNA单链暴露出来,为后续的反应,如第二链cDNA的合成等提供条件。
但如果RNase H活性较强,在cDNA合成过程中,RNA模板可能会在cDNA合成完成之前就被降解,导致cDNA链的长度较短,所以RNase H活性是长片段cDNA合成过程中需要规避的因素。此外,RNase H活性还可能会与反转录酶中的聚合酶活性竞争,从而降低反转录效率。以上特性极大的影响了基因表达分析、cDNA文库构建、RNA测序等实验研究的精准性。比如在RNA测序实验中,需要获得高质量、完整的cDNA文库。高RNase H活性可能会破坏RNA模板,影响cDNA文库的构建质量,导致测序结果的准确性降低,无法准确反映原始RNA的表达情况和序列信息。
图1.RNase H活性的影响。
镁孚泰长片段合成MMLV反转录酶筛选试剂盒
为了提高长片段cDNA合成效率,提升实验结果的准确性,镁孚泰生物依托ZymeEditor定向进化平台,融合五大酶改造技术,特别开发了一款长片段合成MMLV反转录酶筛选试剂盒——Longscript MMLV RTase Screening Kit(Cat.No.LT002-01)。该试剂盒包含10种长片段合成MMLV反转录酶突变体,它们均在MMLV野生型反转录酶的基础上通过定向进化技术改造,实现 RNase H 活性的显著降低,有效提升 cDNA 产量与长片段合成效率,为全长 cDNA 获取等提供优质模板,大幅提升后续研究的准确性。
图2:镁孚泰生物 ZymeEditor 平台五大酶改造技术。
RNase H/RDDP活性比值显著低于WT
如图3数据所示,与野生型(Wild type,WT)相比,镁孚泰长片段合成MMLV反转录酶筛选试剂盒(Cat.No.LT002-01)中10种突变体的RNase H/RNA依赖的DNA聚合酶活性(RDDP)活性比值均显著降低,大部分突变体的该比值仅为WT的20%以下,展现了突变体在相同聚合酶活性下,具有极低的RNase H活性。
图3:以WT的RNase H活性与RDDP活性的比值为100%,镁孚泰长片段MMLV反转录酶筛选试剂盒(Cat.No.LT002-01)10种酶相对WT的RNase H/RDDP活性比值数据图。
产品信息
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